{"id":39387,"date":"2025-03-24T15:26:00","date_gmt":"2025-03-24T14:26:00","guid":{"rendered":"https:\/\/membrapure.de\/?p=39387"},"modified":"2025-10-13T14:54:58","modified_gmt":"2025-10-13T12:54:58","slug":"bestimmung-der-aminosaeuren-in-zellkulturmedien","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/membrapure.de\/de\/bestimmung-der-aminosaeuren-in-zellkulturmedien\/","title":{"rendered":"Bestimmung der Aminos\u00e4uren in Zellkulturmedien"},"content":{"rendered":"\n

Die Validierung einer pr\u00e4zisen und robusten Analysemethode zur Bestimmung von Aminos\u00e4uren in Zellkulturmedien wurde erfolgreich mittels des ARACUS Aminos\u00e4ureanalysators durchgef\u00fchrt. Durch definierte Probenvorbereitung, Verd\u00fcnnungsreihen und Wiederfindungsversuche konnte die Eignung der Methode hinsichtlich Genauigkeit, Wiederholbarkeit und Tagespr\u00e4zision nachgewiesen werden. Die Analyse basiert auf klassischer Nachs\u00e4ulenderivatisierung mit Ninhydrin und liefert zuverl\u00e4ssige Ergebnisse f\u00fcr die Qualit\u00e4tskontrolle und Prozessoptimierung in der Zellkultur.<\/p>\n\n\n\n

<\/p>\n\n\n\n

<\/p>\n\n\n\n

\n\n\n\n

<\/p>\n\n\n\n

Bestimmung der Aminos\u00e4uren in Zellkulturmedien<\/strong><\/p>\n\n\n\n

Die Validierung der Analysemethode soll zeigen, dass sie f\u00fcr die Bestimmung von Aminos\u00e4uren in Zellkulturmedien geeignet ist.<\/p>\n\n\n\n

Probenvorbereitung und Analyse<\/h3>\n\n\n\n

Validierung\/Pr\u00e4zision:<\/strong><\/p>\n\n\n\n

100 \u00b5L der Probe wurden mit 100 \u00b5L internem Standard Norleucin (10 \u00b5mol\/mL) und 600 \u00b5L Probenverd\u00fcnnungspuffer gemischt. 200 \u00b5L der F\u00e4llungsl\u00f6sung wurden hinzugef\u00fcgt und f\u00fcr 20 Minuten im K\u00fchlschrank f\u00fcr die Proteinf\u00e4llung aufbewahrt. Die Probe wurde 5 Minuten lang bei 14000 U\/min zentrifugiert. Anschlie\u00dfend wurde der \u00dcberstand mit einem membraSpin durch Zentrifugation bei 14000 rpm f\u00fcr f\u00fcnf Minuten filtriert. Die partikelfreie L\u00f6sung wurde f\u00fcr die Injektion verwendet. F\u00fcr die Analyse wurden 100 \u00b5L der Probe mit 900 \u00b5L Probenverd\u00fcnnungspuffer verd\u00fcnnt (Verd\u00fcnnung 1:100).<\/p>\n\n\n\n

Genauigkeit\/Wiederfindung:<\/strong><\/p>\n\n\n\n

F\u00fcr die Analyse wurden 2 mL der Probe und 2 mL des Probenverd\u00fcnnungspuffers (einschlie\u00dflich Norleucin, 10 \u00b5mol\/mL) gemischt und mit Probenverd\u00fcnnungspuffer 1:50 verd\u00fcnnt. Die erhaltene Stamml\u00f6sung wurde f\u00fcr die Verd\u00fcnnungsreihen von 100 %, 80 %, 60 %, 40 %, 20 % und 10 % verwendet.<\/p>\n\n\n\n

Tabelle 1:<\/strong> Verd\u00fcnnungsreihen der Stamml\u00f6sung f\u00fcr die Validierung der Genauigkeit.The aim is that the validation of the analytical method should demonstrate that it is suitable for the determination of amino acids in cell culture media.<\/p>\n\n\n\n

Run<\/strong><\/td>stock solution<\/strong><\/td>dilution buffer<\/strong><\/td>%<\/strong><\/td><\/tr>
1<\/td>1000 \u00b5L<\/td>–<\/td>100<\/td><\/tr>
2<\/td>800 \u00b5L<\/td>200 \u00b5L<\/td>80<\/td><\/tr>
3<\/td>600 \u00b5L<\/td>400 \u00b5L<\/td>60<\/td><\/tr>
4<\/td>400 \u00b5L<\/td>600 \u00b5L<\/td>40<\/td><\/tr>
5<\/td>200 \u00b5L<\/td>800 \u00b5L<\/td>20<\/td><\/tr>
6<\/td>100 \u00b5L<\/td>900 \u00b5L<\/td>10<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

Die Proben wurden mit dem Amino Acid Analyzer ARACUS analysiert, der von der membraPure GmbH hergestellt und weltweit vertrieben wird. Der ARACUS verwendet die klassische Routineanalyse von Aminos\u00e4uren durch Nachs\u00e4ulenderivatisierung mit Ninhydrin und die Detektion bei 440 nm und 570 nm.<\/p>\n\n\n\n

Validierung\/Pr\u00e4zision<\/strong><\/p>\n\n\n\n

Die Pr\u00e4zision der Methode wurde durch die Wiederholbarkeit (innerhalb eines Tages) (Tabelle 2 & Tabelle 3) und die mittlere Pr\u00e4zision (zwischen zwei Tagen) (Tabelle 4 & Tabelle 5) bestimmt. Die Intra-Tages-Pr\u00e4zision wurde als relative Standardabweichung (RSD) der Ergebnisse von zehn Durchl\u00e4ufen der Probe am selben Tag berechnet, und die Inter-Tages-Pr\u00e4zision wurde durch die Probenvorbereitung an zehn verschiedenen Tagen untersucht. Es wurden zehn Probenl\u00f6sungen hergestellt, und die Standardabweichung (SD) und die RSD (Variationskoeffizient CV %) wurden berechnet.<\/p>\n\n\n\n

Tabelle 2:<\/strong> Intra-Tages-Pr\u00e4zision der Aminos\u00e4uren in Zellmedienkonzentration in nmol\/g (n=10)<\/p>\n\n\n\n

Amino Acid<\/strong><\/td>Mean <\/strong>x<\/strong>\u0305<\/strong><\/strong><\/td>SD<\/strong><\/td>RSD \/ %<\/strong><\/td><\/tr>
Asp<\/td>13024<\/td>\u00b1 436<\/td>3.34<\/td><\/tr>
Thr<\/td>11475<\/td>\u00b1 250<\/td>2.17<\/td><\/tr>
Ser<\/td>17914<\/td>\u00b1 353<\/td>1.97<\/td><\/tr>
Asn<\/td>11420<\/td>\u00b1 217<\/td>1.9<\/td><\/tr>
Glu<\/td>7903<\/td>\u00b1 210<\/td>2.65<\/td><\/tr>
Gly<\/td>8444<\/td>\u00b1 153<\/td>1.81<\/td><\/tr>
Ala<\/td>21745<\/td>\u00b1 769<\/td>3.53<\/td><\/tr>
Val<\/td>14681<\/td>\u00b1 244<\/td>1.66<\/td><\/tr>
Cys2<\/td>1830<\/td>\u00b1 82<\/td>4.48<\/td><\/tr>
Met<\/td>4295<\/td>\u00b1 70<\/td>1.62<\/td><\/tr>
Ile<\/td>8921<\/td>\u00b1 147<\/td>1.64<\/td><\/tr>
Leu<\/td>14115<\/td>\u00b1 244<\/td>1.72<\/td><\/tr>
Tyr<\/td>3248<\/td>\u00b1 106<\/td>3.26<\/td><\/tr>
Phe<\/td>6938<\/td>\u00b1 166<\/td>2.39<\/td><\/tr>
His<\/td>2807<\/td>\u00b1 40<\/td>1.42<\/td><\/tr>
Trp<\/td>4063<\/td>\u00b1 64<\/td>1.57<\/td><\/tr>
Lys<\/td>7893<\/td>\u00b1 130<\/td>1.64<\/td><\/tr>
NH4<\/sub><\/td>20747<\/td>\u00b1 435<\/td>2.09<\/td><\/tr>
Arg<\/td>6697<\/td>\u00b1 207<\/td>3.09<\/td><\/tr>
Pro<\/td>3348<\/td>\u00b1 82<\/td>2.44<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

Tabelle 3:<\/strong> Intra-Tages-Pr\u00e4zision der Aminos\u00e4urekonzentration im Zellmedium in mg\/g (n=10)<\/p>\n\n\n\n

Amino Acid<\/strong><\/td>Mean <\/strong>x<\/strong>\u0305<\/strong><\/strong><\/td>SD<\/strong><\/td>RSD \/ %<\/strong><\/td><\/tr>
Asp<\/td>1.733<\/td>\u00b1 0.058<\/td>3.34<\/td><\/tr>
Thr<\/td>1.366<\/td>\u00b1 0.0297<\/td>2.17<\/td><\/tr>
Ser<\/td>1.882<\/td>\u00b1 0.037<\/td>1.97<\/td><\/tr>
Asn<\/td>1.508<\/td>\u00b1 0.0286<\/td>1.9<\/td><\/tr>
Glu<\/td>1.162<\/td>\u00b1 0.0308<\/td>2.65<\/td><\/tr>
Gly<\/td>0.634<\/td>\u00b1 0.0114<\/td>1.8<\/td><\/tr>
Ala<\/td>1.937<\/td>\u00b1 0.0685<\/td>3.53<\/td><\/tr>
Val<\/td>1.719<\/td>\u00b1 0.0285<\/td>1.66<\/td><\/tr>
Cys2<\/td>0.221<\/td>\u00b1 0.0099<\/td>4.48<\/td><\/tr>
Met<\/td>0.641<\/td>\u00b1 0.0104<\/td>1.62<\/td><\/tr>
Ile<\/td>1.17<\/td>\u00b1 0.0192<\/td>1.64<\/td><\/tr>
Leu<\/td>1.859<\/td>\u00b1 0.032<\/td>1.72<\/td><\/tr>
Tyr<\/td>0.588<\/td>\u00b1 0.0192<\/td>3.26<\/td><\/tr>
Phe<\/td>1.146<\/td>\u00b1 0.0274<\/td>2.39<\/td><\/tr>
His<\/td>0.435<\/td>\u00b1 0.0062<\/td>1.42<\/td><\/tr>
Trp<\/td>0.829<\/td>\u00b1 0.013<\/td>1.57<\/td><\/tr>
Lys<\/td>1.153<\/td>\u00b1 0.019<\/td>1.64<\/td><\/tr>
NH4<\/sub><\/td>0.374<\/td>\u00b1 0.0078<\/td>2.09<\/td><\/tr>
Arg<\/td>1.166<\/td>\u00b1 0.0361<\/td>3.09<\/td><\/tr>
Pro<\/td>0.385<\/td>\u00b1 0.0094<\/td>2.44<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

Tabelle 4:<\/strong> Pr\u00e4zision der Aminos\u00e4urekonzentration in Zellmedien zwischen den Tagen in nmol\/g (n=10)<\/p>\n\n\n\n

Amino Acid<\/strong><\/td>Mean <\/strong>x<\/strong>\u0305<\/strong><\/strong><\/td>SD<\/strong><\/td>RSD \/ %<\/strong><\/td><\/tr>
Asp<\/td>12494<\/td>\u00b1 720<\/td>5.76<\/td><\/tr>
Thr<\/td>11007<\/td>\u00b1 625<\/td>5.67<\/td><\/tr>
Ser<\/td>17175<\/td>\u00b1 976<\/td>5.68<\/td><\/tr>
Asn<\/td>10852<\/td>\u00b1 739<\/td>6.8<\/td><\/tr>
Glu<\/td>7687<\/td>\u00b1 320<\/td>4.15<\/td><\/tr>
Gly<\/td>8109<\/td>\u00b1 447<\/td>5.51<\/td><\/tr>
Ala<\/td>20265<\/td>\u00b1 1397<\/td>6.89<\/td><\/tr>
Val<\/td>13533<\/td>\u00b1 962<\/td>7.11<\/td><\/tr>
Cys2<\/td>1733<\/td>\u00b1 138<\/td>7.96<\/td><\/tr>
Met<\/td>4151<\/td>\u00b1 193<\/td>4.64<\/td><\/tr>
Ile<\/td>8625<\/td>\u00b1 395<\/td>4.57<\/td><\/tr>
Leu<\/td>13679<\/td>\u00b1 586<\/td>4.28<\/td><\/tr>
Tyr<\/td>3133<\/td>\u00b1 202<\/td>6.44<\/td><\/tr>
Phe<\/td>6695<\/td>\u00b1 331<\/td>4.94<\/td><\/tr>
His<\/td>2683<\/td>\u00b1 155<\/td>5.77<\/td><\/tr>
Trp<\/td>3859<\/td>\u00b1 286<\/td>7.41<\/td><\/tr>
Lys<\/td>7722<\/td>\u00b1 431<\/td>5.58<\/td><\/tr>
NH4<\/sub><\/td>21860<\/td>\u00b1 1389<\/td>6.35<\/td><\/tr>
Arg<\/td>6486<\/td>\u00b1 451<\/td>6.95<\/td><\/tr>
Pro<\/td>2982<\/td>\u00b1 132<\/td>4.42<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

Tabelle 5:<\/strong> Pr\u00e4zision der Aminos\u00e4urekonzentration in Zellmedien zwischen den Tagen in mg\/g (n=10)<\/p>\n\n\n\n

Amino Acid<\/strong><\/td>Mean <\/strong>x<\/strong>\u0305<\/strong><\/strong><\/td>SD<\/strong><\/td>RSD \/ %<\/strong><\/td><\/tr>
Asp<\/td>1.661<\/td>\u00b1 0.0957<\/td>5.76<\/td><\/tr>
Thr<\/td>1.309<\/td>\u00b1 0.0743<\/td>5.67<\/td><\/tr>
Ser<\/td>1.803<\/td>\u00b1 0.1024<\/td>5.68<\/td><\/tr>
Asn<\/td>1.432<\/td>\u00b1 0.0975<\/td>6.8<\/td><\/tr>
Glu<\/td>1.129<\/td>\u00b1 0.047<\/td>4.15<\/td><\/tr>
Gly<\/td>0.608<\/td>\u00b1 0.0335<\/td>5.51<\/td><\/tr>
Ala<\/td>1803<\/td>\u00b1 0.1243<\/td>6.89<\/td><\/tr>
Val<\/td>1.583<\/td>\u00b1 0.1125<\/td>7.11<\/td><\/tr>
Cys2<\/td>0.21<\/td>\u00b1 0.0167<\/td>7.96<\/td><\/tr>
Met<\/td>0.618<\/td>\u00b1 0.0287<\/td>4.64<\/td><\/tr>
Ile<\/td>1.129<\/td>\u00b1 0.0517<\/td>4.57<\/td><\/tr>
Leu<\/td>1.791<\/td>\u00b1 0.0767<\/td>4.28<\/td><\/tr>
Tyr<\/td>0.567<\/td>\u00b1 0.0365<\/td>6.44<\/td><\/tr>
Phe<\/td>1.104<\/td>\u00b1 0.0546<\/td>4.94<\/td><\/tr>
His<\/td>0.416<\/td>\u00b1 0.024<\/td>5.77<\/td><\/tr>
Trp<\/td>0.787<\/td>\u00b1 0.0583<\/td>7.41<\/td><\/tr>
Lys<\/td>1.127<\/td>\u00b1 0.0629<\/td>5.58<\/td><\/tr>
NH4<\/sub><\/td>0.393<\/td>\u00b1 0.025<\/td>6.35<\/td><\/tr>
Arg<\/td>1.128<\/td>\u00b1 0.0784<\/td>6.95<\/td><\/tr>
Pro<\/td>0.342<\/td>\u00b1 0.0151<\/td>4.42<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

Genauigkeit (Wiederfindung)<\/strong><\/p>\n\n\n\n

In dieser Validierungsstudie wurde die Genauigkeit der Methode untersucht, indem die Wiederfindungswerte berechnet wurden, die durch die Analyse der mit Norleucin-Standard (100 \u00b5l\/ml) vorbereiteten Probe erhalten wurden und 100%, 80%, 60%, 40%, 20% und 10% entsprechen (Tabelle 6).<\/p>\n\n\n\n

Tabelle 6:<\/strong> Wiederfindungswerte f\u00fcr Verd\u00fcnnungsreihen f\u00fcr jede Aminos\u00e4ure, die in Zellkulturmedien analysiert wurden.<\/p>\n\n\n\n

Cell media<\/strong><\/td>100%<\/strong><\/td>80%<\/strong><\/td>60%<\/strong><\/td>40%<\/strong><\/td>20%<\/strong><\/td>10%<\/strong><\/td><\/tr>
Run<\/strong><\/td>1 [nmoL\/g]<\/strong><\/td>2 [nmoL\/g]<\/strong><\/td>3 [nmoL\/g]<\/strong><\/td>4 [nmoL\/g]<\/strong><\/td>5 [nmoL\/g]<\/strong><\/td>6 [nmoL\/g]<\/strong><\/td><\/tr>
Nle<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>9889<\/td>8232<\/td>6209<\/td>4280<\/td>2109<\/td>1028<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 153<\/td>\u00b1 135<\/td>\u00b1 148<\/td>\u00b1 65<\/td>\u00b1 74<\/td>\u00b1 49<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>1.54<\/td>1.63<\/td>2.38<\/td>1.51<\/td>3.5<\/td>4.76<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>98.9<\/td>83.2<\/td>62.7<\/td>43.2<\/td>21.3<\/td>10.3<\/td><\/tr>
Asp<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>12911<\/td>10163<\/td>7551<\/td>4937<\/td>2484<\/td>1219<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 320<\/td>\u00b1 117<\/td>\u00b1 166<\/td>\u00b1 55<\/td>\u00b1 71<\/td>\u00b1 32<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>2.47<\/td>1.15<\/td>2.19<\/td>1.11<\/td>2.85<\/td>2.62<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>78.7<\/td>58.4<\/td>38.2<\/td>19.2<\/td>9.4<\/td><\/tr>
Thr<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>11330<\/td>8992<\/td>6721<\/td>4465<\/td>2246<\/td>1218<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 179<\/td>\u00b1 160<\/td>\u00b1 186<\/td>\u00b1 119<\/td>\u00b1 94<\/td>\u00b1 54<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>1.57<\/td>1.77<\/td>2.76<\/td>2.66<\/td>4.18<\/td>4.43<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>79.3<\/td>59.3<\/td>39.4<\/td>19.8<\/td>10.7<\/td><\/tr>
 Ser<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>17866<\/td>14341<\/td>10693<\/td>7104<\/td>3661<\/td>1897<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 353<\/td>\u00b1 149<\/td>\u00b1 137<\/td>\u00b1 128<\/td>\u00b1 82<\/td>\u00b1 39<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>1.97<\/td>1.03<\/td>1.28<\/td>1.8<\/td>2.23<\/td>2.05<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>80.2<\/td>59.8<\/td>39.7<\/td>20.4<\/td>10.6<\/td><\/tr>
Asn<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>12380<\/td>9975<\/td>7341<\/td>4826<\/td>2436<\/td>1252<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 407<\/td>\u00b1 217<\/td>\u00b1 143<\/td>\u00b1 146<\/td>\u00b1 96<\/td>\u00b1 57<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>3.28<\/td>2.17<\/td>1.94<\/td>3.02<\/td>3.94<\/td>4.55<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>80.5<\/td>59.2<\/td>38.9<\/td>19.6<\/td>10.1<\/td><\/tr>
Glu<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>9207<\/td>7423<\/td>5381<\/td>3748<\/td>1926<\/td>1084<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 369<\/td>\u00b1 180<\/td>\u00b1 129<\/td>\u00b1 102<\/td>\u00b1 57<\/td>\u00b1 26<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>4.01<\/td>2.42<\/td>2.39<\/td>2.72<\/td>2.95<\/td>2.39<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>80.6<\/td>58.4<\/td>40.7<\/td>20.9<\/td>11.7<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
Gly<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>8242<\/td>6663<\/td>5005<\/td>3328<\/td>1779<\/td>891<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 158<\/td>\u00b1 197<\/td>\u00b1 107<\/td>\u00b1 91<\/td>\u00b1 37<\/td>\u00b1 24<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>1.91<\/td>2.95<\/td>2.13<\/td>2.73<\/td>2.07<\/td>2.69<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>80.8<\/td>60.7<\/td>40.3<\/td>21.5<\/td>10.8<\/td><\/tr>
Ala<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>20253<\/td>16412<\/td>12318<\/td>8186<\/td>4244<\/td>2148<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 434<\/td>\u00b1 186<\/td>\u00b1 307<\/td>\u00b1 93<\/td>\u00b1 79<\/td>\u00b1 56<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>2.14<\/td>1.13<\/td>2.49<\/td>1.13<\/td>1.86<\/td>2.6<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>81<\/td>60.8<\/td>40.4<\/td>20.9<\/td>10.6<\/td><\/tr>
Val<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>14336<\/td>11278<\/td>8415<\/td>5493<\/td>2720<\/td>1317<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 347<\/td>\u00b1 155<\/td>\u00b1 194<\/td>\u00b1 120<\/td>\u00b1 68<\/td>\u00b1 41<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>2.42<\/td>1.37<\/td>2.3<\/td>2.18<\/td>2.5<\/td>3.11<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>78.6<\/td>58.6<\/td>38.3<\/td>18.9<\/td>9.1<\/td><\/tr>
 Cys2<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>1672<\/td>1308<\/td>1046<\/td>643<\/td>326<\/td>151<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 109<\/td>\u00b1 46<\/td>\u00b1 61<\/td>\u00b1 42<\/td>\u00b1 17<\/td>\u00b1 9<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>6.51<\/td>3.51<\/td>5.83<\/td>6.53<\/td>5.21<\/td>5.96<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>78.2<\/td>62.5<\/td>38.4<\/td>19.4<\/td>9<\/td><\/tr>
Met<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>4169<\/td>3288<\/td>2513<\/td>1674<\/td>914<\/td>430<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 152<\/td>\u00b1 116<\/td>\u00b1 78<\/td>\u00b1 53<\/td>\u00b1 48<\/td>\u00b1 17<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>3.64<\/td>3.52<\/td>3.1<\/td>3.16<\/td>5.25<\/td>3.95<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>78.8<\/td>60.2<\/td>40.1<\/td>21.9<\/td>10.3<\/td><\/tr>
Ile<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>8690<\/td>6901<\/td>5254<\/td>3508<\/td>1783<\/td>984<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 118<\/td>\u00b1 73<\/td>\u00b1 112<\/td>\u00b1 52<\/td>\u00b1 36<\/td>\u00b1 28<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>1.35<\/td>1.05<\/td>2.13<\/td>1.48<\/td>2.01<\/td>2.84<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>79.4<\/td>60.4<\/td>40.3<\/td>20.5<\/td>11.3<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
Leu<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>14786<\/td>11617<\/td>8495<\/td>5693<\/td>2795<\/td>1387<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 227<\/td>\u00b1 196<\/td>\u00b1 163<\/td>\u00b1 131<\/td>\u00b1 74<\/td>\u00b1 49<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>1.53<\/td>1.68<\/td>1.91<\/td>2.3<\/td>2.64<\/td>3.53<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>78.5<\/td>58.1<\/td>38.5<\/td>18.9<\/td>9.3<\/td><\/tr>
Tyr<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>2958<\/td>2347<\/td>1743<\/td>1209<\/td>573<\/td>312<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 138<\/td>\u00b1 129<\/td>\u00b1 69<\/td>\u00b1 52<\/td>\u00b1 23<\/td>\u00b1 14<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>4.66<\/td>5.49<\/td>3.95<\/td>4.3<\/td>4.01<\/td>4.48<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>79.3<\/td>58.9<\/td>40.8<\/td>19.3<\/td>10.5<\/td><\/tr>
Phe<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>7083<\/td>5672<\/td>4238<\/td>2721<\/td>1393<\/td>694<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 109<\/td>\u00b1 138<\/td>\u00b1 78<\/td>\u00b1 63<\/td>\u00b1 36<\/td>\u00b1 27<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>1.53<\/td>2.43<\/td>1.84<\/td>2.31<\/td>2.58<\/td>3.89<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>80.1<\/td>59.8<\/td>38.4<\/td>19.6<\/td>9.7<\/td><\/tr>
His<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>2736<\/td>2164<\/td>1613<\/td>1085<\/td>546<\/td>249<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 71<\/td>\u00b1 53<\/td>\u00b1 48<\/td>\u00b1 43<\/td>\u00b1 18<\/td>\u00b1 12<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>2.59<\/td>2.44<\/td>2.97<\/td>3.96<\/td>3.29<\/td>4.81<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>79.1<\/td>58.9<\/td>39.6<\/td>19.9<\/td>9.1<\/td><\/tr>
Trp<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>3780<\/td>2934<\/td>2236<\/td>1579<\/td>728<\/td>348<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 83<\/td>\u00b1 88<\/td>\u00b1 105<\/td>\u00b1 63<\/td>\u00b1 21<\/td>\u00b1 15<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>2.19<\/td>2.99<\/td>4.69<\/td>3.98<\/td>2.88<\/td>4.31<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>77.8<\/td>59.1<\/td>41.7<\/td>19.2<\/td>9.2<\/td><\/tr>
Lys<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>8369<\/td>6736<\/td>5012<\/td>3312<\/td>1670<\/td>822<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 91<\/td>\u00b1 84<\/td>\u00b1 75<\/td>\u00b1 49<\/td>\u00b1 32<\/td>\u00b1 43<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>1.08<\/td>1.24<\/td>1.49<\/td>1.47<\/td>1.91<\/td>5.23<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>80.4<\/td>59.8<\/td>39.5<\/td>19.9<\/td>9.8<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
NH4<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>27864<\/td>22820<\/td>16914<\/td>11677<\/td>5642<\/td>2832<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 364<\/td>\u00b1 242<\/td>\u00b1 441<\/td>\u00b1 408<\/td>\u00b1 218<\/td>\u00b1 140<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>1.3<\/td>1.06<\/td>2.6<\/td>3.49<\/td>3.86<\/td>4.94<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>81.8<\/td>60.7<\/td>41.9<\/td>20.2<\/td>10.1<\/td><\/tr>
Arg<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>7328<\/td>5905<\/td>4265<\/td>2853<\/td>1532<\/td>785<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 175<\/td>\u00b1 88<\/td>\u00b1 137<\/td>\u00b1 108<\/td>\u00b1 38<\/td>\u00b1 53<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>2.38<\/td>1.49<\/td>3.21<\/td>3.78<\/td>2.48<\/td>6.75<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>80.5<\/td>58.3<\/td>38.9<\/td>20.9<\/td>10.7<\/td><\/tr>
Pro<\/strong><\/td><\/tr>
Mean x\u0305<\/td>3386<\/td>2715<\/td>1962<\/td>1364<\/td>646<\/td>314<\/td><\/tr>
SD<\/td>\u00b1 113<\/td>\u00b1 147<\/td>\u00b1 68<\/td>\u00b1 56<\/td>\u00b1 29<\/td>\u00b1 17<\/td><\/tr>
RSD %<\/td>3.33<\/td>5.41<\/td>3.46<\/td>4.1<\/td>4.48<\/td>5.41<\/td><\/tr>
Discovery %<\/td>100<\/td>80.1<\/td>57.9<\/td>40.2<\/td>19<\/td>9.2<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

Linearit\u00e4t<\/strong><\/p>\n\n\n\n

Die Linearit\u00e4t ist wichtig f\u00fcr die Best\u00e4tigung der Empfindlichkeit der Methode bei der Analyse der Aminos\u00e4urekonzentration innerhalb eines bestimmten Bereichs.<\/p>\n\n\n\n

Die Linearit\u00e4t ist die F\u00e4higkeit, Testergebnisse zu erhalten, die direkt proportional zur Konzentration der Aminos\u00e4ure sind. Die Linearit\u00e4t wurde durch f\u00fcnf Injektionen von sechs verschiedenen Konzentrationen (Injektionsvolumen 5 \u00b5l, 10 \u00b5l, 20 \u00b5l, 30 \u00b5l, 40 \u00b5l, 50 \u00b5l) bestimmt. Die durchschnittlichen Peakfl\u00e4chen wurden gegen die Konzentrationen aufgetragen. Anschlie\u00dfend wurde die Linearit\u00e4t anhand der Kalibrierungskurve bewertet, um den Korrelationskoeffizienten zu berechnen (Tabelle 7). Im Allgemeinen wird ein Korrelationskoeffizient (R2) > 0,990 als Beweis f\u00fcr eine akzeptable Anpassung der Daten an die Regressionslinie angesehen.<\/p>\n\n\n\n

Tabelle 7:<\/strong> Ergebnis der Linearit\u00e4t beim Auftragen der durchschnittlichen Peakfl\u00e4che gegen verschiedene Konzentrationen von Aminos\u00e4uren.<\/p>\n\n\n\n

Amino Acid<\/strong><\/td>R\u00b2<\/strong><\/td><\/tr>
Asp<\/td>0.9999<\/td><\/tr>
Thr<\/td>0.9996<\/td><\/tr>
Ser<\/td>0.9999<\/td><\/tr>
Asn<\/td>0.9999<\/td><\/tr>
Glu<\/td>0.9997<\/td><\/tr>
Gly<\/td>0.9995<\/td><\/tr>
Ala<\/td>0.9996<\/td><\/tr>
Val<\/td>0.9994<\/td><\/tr>
Cys2<\/td>0.9989<\/td><\/tr>
Met<\/td>0.9996<\/td><\/tr>
Ile<\/td>0.9994<\/td><\/tr>
Leu<\/td>0.9998<\/td><\/tr>
Nle<\/td>0.9990<\/td><\/tr>
Tyr<\/td>0.9991<\/td><\/tr>
Phe<\/td>0.9991<\/td><\/tr>
His<\/td>0.9993<\/td><\/tr>
Trp<\/td>0.9999<\/td><\/tr>
Lys<\/td>0.9996<\/td><\/tr>
NH4<\/sub><\/td>0.9999<\/td><\/tr>
Arg<\/td>0.9997<\/td><\/tr>
Pro<\/td>0.9968<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

Tabelle 8:<\/strong> Nachweis- und Bestimmungsgrenze f\u00fcr jede Aminos\u00e4ure, die in Zellkulturmedien analysiert wurde.<\/p>\n\n\n\n

Amino Acid<\/strong><\/td>LOD nmoL\/g<\/strong><\/td>LOQ nmol\/g<\/strong><\/td><\/tr>
Asp<\/td>1.9<\/td>5.7<\/td><\/tr>
Thr<\/td>1.4<\/td>4.2<\/td><\/tr>
Ser<\/td>1.8<\/td>5.4<\/td><\/tr>
Asn<\/td>1.9<\/td>5.7<\/td><\/tr>
Glu<\/td>1.2<\/td>3.6<\/td><\/tr>
Gly<\/td>1.6<\/td>4.8<\/td><\/tr>
Ala<\/td>1.7<\/td>5.1<\/td><\/tr>
Val<\/td>1.1<\/td>3.3<\/td><\/tr>
Cys2<\/td>1.4<\/td>4.2<\/td><\/tr>
Met<\/td>1.5<\/td>4.5<\/td><\/tr>
Ile<\/td>1.8<\/td>5.4<\/td><\/tr>
Leu<\/td>1.3<\/td>4.2<\/td><\/tr>
Tyr<\/td>1.4<\/td>4.2<\/td><\/tr>
Phe<\/td>1.7<\/td>5.1<\/td><\/tr>
His<\/td>1.5<\/td>4.5<\/td><\/tr>
Trp<\/td>1.3<\/td>3.9<\/td><\/tr>
Lys<\/td>1.6<\/td>4.8<\/td><\/tr>
NH4<\/sub><\/td>2.1<\/td>6.3<\/td><\/tr>
Arg<\/td>1.5<\/td>4.4<\/td><\/tr>
Pro<\/td>1.8<\/td>5.4<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
\"\"<\/figure>\n\n\n\n

Abbildung 2: \u00dcberlappung von drei Chromatogrammen des Aminos\u00e4urenstandards.<\/sup><\/p>\n\n\n\n

\"\"<\/figure>\n\n\n\n

Abbildung 3: \u00dcberlappung von drei Chromatogrammen einer Zellmedienprobe.<\/sup><\/p>\n\n\n\n

\"\"<\/figure>\n\n\n\n

Abbildung 4: \u00dcberlappung eines Chromatogramms des Aminos\u00e4urenstandards und eines Chromatogramms der Zellmedienprobe.<\/sup><\/p>\n\n\n\n

Schlussfolgerung<\/strong><\/p>\n\n\n\n

Die Methode wurde anhand verschiedener Validierungsparameter wie Richtigkeit, Pr\u00e4zision und Linearit\u00e4t validiert. Es wurde festgestellt, dass alle Validierungsparameter innerhalb der Akzeptanzkriterien liegen. Es zeigt sich, dass die Methode pr\u00e4zise, genau, linear, reproduzierbar und wiederholbar ist. Diese Ergebnisse zeigen, dass die Methode praktische Anwendung f\u00fcr die Analyse von Aminos\u00e4uren in Zellkulturmedien finden k\u00f6nnte.<\/p>\n\n\n\n

Referenzen<\/strong><\/p>\n\n\n\n

Salazar, M. Keusgen, J. von Hagen, Amino Acids in the cultivation of mammalian cells, Amino Acids (2016) 48:1161-1171.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

Die Validierung einer pr\u00e4zisen und robusten Analysemethode zur Bestimmung von Aminos\u00e4uren in Zellkulturmedien wurde erfolgreich mittels des ARACUS Aminos\u00e4ureanalysators durchgef\u00fchrt. Durch definierte Probenvorbereitung, Verd\u00fcnnungsreihen und Wiederfindungsversuche konnte die Eignung der Methode hinsichtlich Genauigkeit, Wiederholbarkeit und Tagespr\u00e4zision nachgewiesen werden. Die Analyse basiert auf klassischer Nachs\u00e4ulenderivatisierung mit Ninhydrin und liefert zuverl\u00e4ssige Ergebnisse f\u00fcr die Qualit\u00e4tskontrolle und Prozessoptimierung […]<\/p>\n","protected":false},"author":19,"featured_media":39268,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"wds_primary_category":0,"footnotes":""},"categories":[162],"tags":[],"class_list":["post-39387","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-forschung"],"rttpg_featured_image_url":{"full":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture.png",1200,900,false],"landscape":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture.png",1200,900,false],"portraits":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture.png",1200,900,false],"thumbnail":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture-150x150.png",150,150,true],"medium":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture-300x225.png",300,225,true],"large":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture-1024x768.png",800,600,true],"1536x1536":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture.png",1200,900,false],"2048x2048":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture.png",1200,900,false],"woocommerce_thumbnail":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture-300x300.png",300,300,true],"woocommerce_single":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture-600x450.png",600,450,true],"woocommerce_gallery_thumbnail":["https:\/\/membrapure.de\/wp-content\/uploads\/2025\/03\/cell-culture-100x100.png",100,100,true]},"rttpg_author":{"display_name":"Annalena Bittner","author_link":"https:\/\/membrapure.de\/de\/author\/annalena\/"},"rttpg_comment":0,"rttpg_category":"Forschung<\/a>","rttpg_excerpt":"Die Validierung einer pr\u00e4zisen und robusten Analysemethode zur Bestimmung von Aminos\u00e4uren in Zellkulturmedien wurde erfolgreich mittels des ARACUS Aminos\u00e4ureanalysators durchgef\u00fchrt. Durch definierte Probenvorbereitung, Verd\u00fcnnungsreihen und Wiederfindungsversuche konnte die Eignung der Methode hinsichtlich Genauigkeit, Wiederholbarkeit und Tagespr\u00e4zision nachgewiesen werden. Die Analyse basiert auf klassischer Nachs\u00e4ulenderivatisierung mit Ninhydrin und liefert zuverl\u00e4ssige Ergebnisse f\u00fcr die Qualit\u00e4tskontrolle und Prozessoptimierung…","_links":{"self":[{"href":"https:\/\/membrapure.de\/de\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/39387","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/membrapure.de\/de\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/membrapure.de\/de\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/membrapure.de\/de\/wp-json\/wp\/v2\/users\/19"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/membrapure.de\/de\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=39387"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/membrapure.de\/de\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/39387\/revisions"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/membrapure.de\/de\/wp-json\/wp\/v2\/media\/39268"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/membrapure.de\/de\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=39387"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/membrapure.de\/de\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=39387"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/membrapure.de\/de\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=39387"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}